Пояснення: чому тести кількох людей із симптомами Covid негативні?
Багато людей із симптомами Covid-19 дали негативний результат. Існує кілька ймовірних причин, таких як мутації вірусу, що не виявляються, якість відбору та тестування, а також ефективність наборів RT-PCR.
Тести можуть йти неправильно на різних етапах, від поганого збору та зберігання зразків до неправильного вилучення та посилення. (Експрес-фото: Вішал Шривастав) Оскільки Індія намагається впоратися з безпрецедентним попитом на тести RT-PCR, звіти показують, що до 20% пацієнтів із симптомами Covid-19 мають негативний результат.
Ця очевидна тенденція хибнонегативних результатів може позбавити серйозних пацієнтів госпіталізації та невідкладної допомоги, дозволяючи безсимптомним пересуватися та поширювати вірус. Ця тенденція спонукала експертів, у тому числі директора AIIMS д-ра Рандіпа Гулеріа, рекомендувати лікування Covid-19 всім, у кого є класичні симптоми, незалежно від результатів RT-PCR.
Інформаційний бюлетень| Натисніть, щоб отримати найкращі пояснення за день у папку 'Вхідні'.
Чому помилкові негативи
Тести RT-PCR, які вважаються золотим стандартом у діагностиці Covid-19, не мають бути ідеальними. Мінімальна чутливість (здатність виявляти позитиви), яку вимагає Індійська рада медичних досліджень (ICMR) для підтвердження тесту RT-PCR, становить 95%. Це означає, що очікується до 5% помилково негативних результатів.
Хоча окремі повідомлення свідчать про те, що частка помилково негативних результатів зростає по всій Індії, поки що немає дослідження, яке б підтвердило це.
Теоретично чотири основні фактори визначають точність тесту RT-PCR: вірусне навантаження у людини, якість збору та обробки зразків, ефективність самого набору для тестування, а також контрольний показник для інтерпретації тесту.
ВІРУСНЕ НАВАНТАЖЕННЯ: Як правило, Covid-19 адекватно проявляється на п’ятий день циклу інфекції. Якщо тестувати раніше після зараження, інфікована людина може виявитися негативною на Covid. Можливо, це не є основним фактором недавньої хибнонегативної тенденції, оскільки деякі мутанти Covid-19, очевидно, мають ранні симптоми.
У низки пацієнтів із симптомами, які дали хибнонегативний результат аналізів RT-PCR, згодом було підтверджено Covid-позитивність у тестах на бронхоальвеолярний лаваж (BAL), які збирають зразки з нижніх дихальних шляхів за допомогою бронхоскопа. Це призвело до припущень, що деякі мутанти обходять верхні дихальні шляхи, щоб націлитися на легені — сценарій, який може заперечити тесту RT-PCR, заснованому на зразку, зібраному з носової порожнини та горла, вірусне навантаження, необхідне для точного результату.
ВИБУХ ЄДНОСТІ: Кількість тестових лабораторій Covid в Індії зросла з 14 у лютому 2020 року до понад 2400 у квітні 2021 року. Таке швидке розширення вимагало схвалення сотень лабораторій для тестування RT-PCR та навчання тисяч техніків у поспіху.
В якості запобіжного заходу ICMR у липні 2020 року перерахував 30 лабораторій контролю якості для перевірки всіх затверджених нею лабораторій Covid. Відтоді було додано ще 8 лабораторій контролю якості. Однак джерела в кількох лабораторіях у трьох штатах сказали, що було проведено лише кілька перевірок обладнання та інструментів.
В ідеалі з кожної лабораторії слід періодично випадково відбирати поєднання позитивних і негативних зразків для повторного тестування. Це колись робили? Так. Чи робилося це послідовно? Ні, сказав науковець з інституту ICMR, який не уповноважений спілкуватися зі ЗМІ.
З липня 2020 року ICMR та низка лабораторій контролю якості зберігали мовчання.
ЕЛЕМЕНТ ЛЮДИНИ: Тести можуть йти не так на різних етапах — від поганого збору та зберігання зразків до неправильного вилучення та посилення. Усі набори RT-PCR включають внутрішній контроль (IC) для захисту від сценарію, коли РНК не екстрагується/ампліфікується, що призводить до хибнонегативних результатів. IC може бути екзогенним або ендогенним. Це є екзогенним, коли штучну молекулу-матрицю РНК додають до кожного зразка перед вилученням РНК. Тест вважається недійсним, якщо синтетична РНК не виявлена після екстракції і призначено повторне дослідження. А ендогенний контроль використовує ген «домашнього господарства» людини, присутній у зразку; його невиявлення після процедури виділення РНК робить тест недійсним.
Ген домашнього господарства людини також забезпечує якість зразка… Але понад 75% наборів RT-PCR на індійському ринку використовують дешевші екзогенні внутрішні засоби контролю, сказав молекулярний біолог із Мумбаї.
У СОП ICMR від квітня 2020 року щодо RT-PCR зазначено, що екзогенний контроль для екстракції можна ігнорувати, оскільки він не відображатиме якість зібраного зразка. Він рекомендував, щоб окрему РНКазу P або будь-який інший людський домашній ген… слід запускати паралельно в окремій пробірці… (щоб) перевірити як якість зібраного зразка, так і процедуру екстракції.
У травні 2020 року мега-тендер, проведений ICMR/HLL на набори RT-PCR, передбачав подібні вимоги. Ряд виробників стверджували, що різні компанії використовують різні засоби внутрішнього контролю, включаючи екзогенні, які були схвалені регулюючими органами, такими як FDA та CEIVD, і що несприятливий відбір на основі генів ведення домашнього господарства перешкоджатиме чесній конкуренції. Згодом тендер був переглянутий, щоб включити як ендогенні, так і екзогенні варіанти внутрішнього контролю.
ВІРУСНА МУТАЦІЯ: Тест RTR-PCR націлений на конкретну область одного або кількох вірусних генів, щоб виявити його присутність. Тест може дати помилково негативні результати, якщо в сегменті оцінюваного геному виникає мутація. Тести, які використовують декілька генетичних цілей, як-от ті, що використовуються в Індії, менш ймовірно будуть обдурені мутаціями.
Регулятори, такі як FDA США, регулярно контролюють вплив мутацій на тести RT-PCR Хоча експерти, такі як д-р Ракеш Мішра, директор Центру клітинної та молекулярної біології Хайдарабаду (CCMB), вважають, що ICMR має розпочати подібні вправи, це може бути не так. легко контролювати в режимі реального часу понад 200 наборів RT-PCR, затверджених в Індії, проти нових мутацій.
По-перше, жоден виробник не оприлюднив (або не буде) оприлюднити детальну послідовність своїх тестів. Під час подання на перевірку до ICMR вони згадують лише гени-мішені, а не послідовність праймерів, сказав старший науковий співробітник Міністерства охорони здоров’я.
Однак досі є підстави відчувати себе досить впевнено навіть за відсутності будь-якої перевірки ефективності в реальному часі. Поки що варіанти Covid-19 мають переважно мутації в гені S (шипковий білок). У більшості наборів тут використовуються законсервовані (незмінні) області мішеней, сказав д-р Шанта Датта, директор Національного інституту холери та кишкових захворювань (NICED), Калькутта.
Обвал ціни
За один рік ціна набору RT-PCR впала з понад 1100 рупій до менш ніж 40 рупій. Оскільки звільнення від імпортного мита було скасовано в жовтні 2020 року, більшість іноземних брендів залишили ринок Індії через додатковий тягар витрат на 15%. Ряд індійських брендів також відмовляються продавати нижче 100 рупій. Багато знайшли відданих корпоративних клієнтів, які не проти доплатити, щоб забезпечити якість. Деякі навіть пропонують кілька наборів для ПЛР за різними цінами.
Хоча ніхто не говорить про це в записі, багато хто сумнівається в якості дешевшої конкуренції. Контрапозиція полягає в тому, що кожен тестовий набір, доступний на ринку, відповідає критеріям перевірки ICMR і що будь-яка цінова війна в кінцевому підсумку приносить користь споживачеві.
Проте не всі переконані. Відповідне зниження вартості лабораторного тесту становить від 4500 рупій до 800 рупій. Крім того, чи знає людина, яка відвідує місцеву лабораторію для тесту на Covid, який набір використовується? Скільки лабораторій витратить 100 рупій, якщо вони зможуть обійтися використанням набору Rs-40? сказав один із перших індійських виробників наборів для ПЛР Covid.
ПРИЄДНУЙСЯ ЗАРАЗ :Телеграм-канал Express пояснив
The Значення Ct
Тест RT-PCR ампліфікує нуклеїнову кислоту, виділену із зразка, щоб виявити специфічну для вірусу Covid-19. Посилення відбувається циклами з пороговим значенням (Ct). Зрозуміло, що чим вище вірусна присутність/навантаження, тим нижче значення Ct або кількість циклів ампліфікації, необхідних для того, щоб його можна було виявити.
ICMR встановив значення Ct на 35 для негативних результатів. Крім цього, будь-який потенційно присутній слід вірусу вважається незначним, а зразок визнається негативним на Covid.
Але деякі штати, такі як Махараштра, намагалися розширити межу прийнятності, пропонуючи значення Ct 24. Оскільки це потенційно виключало б велику кількість людей з кількісно нижчим, але клінічно значущим вірусним навантаженням, ICMR підтвердив свою позицію щодо значення Ct 35 .
Однак немає ясності, якщо всі штати дотримуються одного контрольного показника Ct. За словами керівників принаймні двох багатодержавних лабораторій, вони отримали суперечливі, а іноді й необґрунтовані усні інструкції щодо таких параметрів тестування. Навіть молекулярний тест не застрахований від суб’єктивної упередженості.
Поділіться Зі Своїми Друзями:
